随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合,而不能确切的反映体内的抗体及 CK 的水平。 80 年代,国外的科研工作者根据 ELISA 技术的基本原理,建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和 CK 分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术( ELISPOT )。因其具有较高的特异性和敏感性,目前正被国内外广泛应用,对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。
ELISPOT 法源自 ELISA ,又突破传统 ELISA 法,是定量 ELISA 技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白,它们最大的不同在于:
- ELISA 通过显色反应,在酶标仪上测定吸光度,与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
- ELISPOT 也是通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下人工计数斑点或通过 CTL 公司的 ELISPOT 分析系统对斑点进行计数, 1 个斑点代表 1 个细胞,从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。(某些研究不仅要测细胞因子生成量,还需检测分泌此细胞因子的细胞频率)
- 由于是单细胞水平检测, ELISPOT 比 ELISA 和有限稀释法等更灵敏,能从 20 万 -30 万细胞中检出 1 个分泌该蛋白的细胞。
- 捕获抗体为 BD 、 R&D 、 Mabtech 、 Diaclone 生产的高亲和力、高特异性、低内毒素单抗,在研究者以刺激剂激活细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。
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